张解元     袁 虹      李 谌     李全营     郭 威      刘丹平

  摘要:目的 比较腺病毒载体Ad-BMP-2-内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site，IRES）-低氧诱导因子1α突变型（hypoxia inducible factor 1αmu，HIF-1αmu）与Ad-巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）-BMP-2-IRES-人源化海肾绿色荧光蛋白1（human renilla reniformis green fluorescent protein 1，hrGFP-1）分别转染BMSCs后的成骨效应，优化成骨细胞种子来源。 方法取1月龄新西兰大白兔骨髓分离培养BMSCs。取第3代BMSCs进行病毒液转染，根据转染病毒液不同将实验分为4组，A、B、C组分别采用感染复数（multiplicity of infection，MOI）为50、100、150和200的Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu、Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1、Ad-CMV-IRES-hrGFP-1（空腺病毒载体）转染细胞，D组为未被转染的BMSCs。选择最佳MOI值进行观察。转染后采用免疫组织化学染色检测BMP-2表达，Western blot检测BMP-2和HIF-1α蛋白表达，ALP活性测定和钙结节茜素红染色检测细胞成骨分化能力。 结果A、B、C组最佳MOI值分别为200、150和100。免疫组织化学染色示，A、B组BMP-2染色呈阳性，C、D组呈阴性；A组阳性细胞数明显多于B组（P < 0.05）。Western blot检测示，A、B组BMP-2蛋白表达明显高于C、D组（P < 0.05），A组高于B组（P < 0.05）；A组HIF-1α蛋白表达明显高于其余3组（P < 0.05），其余3组间差异无统计学意义（P > 0.05）。A、B组ALP活性明显高于C、D组（P < 0.05），A组高于B组（P < 0.05）。茜素红染色示，A、B组可见明显钙结节，C、D组未见钙结节形成；且A组钙结节数量多于B组（P < 0.05）。 结论单载体双基因Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu与单载体单基因Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1分别转染兔BMSCs后，前者BMP-2和成骨效应表达均高于后者。