杜 超       蒋明德      曾维政     郑淑梅    魏晓龙

目的利用重组腺病毒Ad-人基质金属蛋白酶1（human matrix metalloproteinase 1，hMMP-1）体外转染大鼠BMSCs，为BMSCs联合hMMP-1基因移植治疗肝纤维化奠定实验基础。 方法取2～3周龄SD大鼠骨髓采用全骨髓贴壁法分离培养BMSCs，传至第3代并进行鉴定；用携带增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）标记的重组腺病毒Ad-hMMP-1-EGFP体外转染第3代BMSCs，荧光显微镜下观察转染情况，流式细胞仪检测转染效率并确定最佳感染复数（multiplicity of infection，MOI）。实验分为未转染BMSCs组（A组）、Ad-EGFP转染BMSCs组（B组）及Ad-hMMP-1-EGFP转染BMSCs组（C组），采用MTT法检测转染后细胞增殖情况，RT-PCR及Western blot分别检测转染后各组细胞内hMMP-1基因和蛋白表达情况，ELISA法检测上清中蛋白hMMP-1分泌水平，hMMP-1酶活性荧光定量试剂盒测定其活性。 结果重组腺病毒转染BMSCs后24 h可见绿色荧光表达，72 h时荧光强度最高，最佳MOI为200。MTT检测示3组细胞均于培养3 d进入对数生长期，6 d后进入平台期；各时间点3组间细胞吸光度（A）值比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）。RT-PCR、Western blot及ELISA检测示，A、B组均无hMMP-1基因和蛋白表达，C组hMMP-1基因和蛋白均高效表达。荧光定量试剂盒测定A、B组均未检测到hMMP-1酶活性，C组hMMP-1酶活性为1.24 nmol/（mg·min）。 结论利用重组腺病毒Ad-hMMP-1成功将外源基因导入大鼠BMSCs并高效表达，为BMSCs联合hMMP-1基因移植治疗肝纤维化奠定了实验基础。