郭杨        马勇        董睿      刘尚仑       屠娟

摘要:目的探讨低强度脉冲超声（low intensive pulsed ultrasound，LIPUS）干预后的同种异体软骨细胞-藻酸钙凝胶复合物修复兔膝关节软骨缺损的有效性。 方法取8只2周龄新西兰白兔，采用机械法联合Ⅱ型胶原酶消化法分离双侧膝关节软骨细胞。取第3代细胞与1.2%藻酸钠溶液制成细胞悬液，调整细胞密度为5 × 106个/mL，制备软骨细胞-藻酸钙凝胶复合物，并给予超声干预，参数为：中心频率1 MHz，脉冲重复频率1 kHz，超声强度60 mW/cm2，作用周期50，作用时间20 min，每天1次，共干预3 d。取28～35周龄健康新西兰白兔18只，体重2.1～2.8 kg，随机分为超声凝胶组、普通凝胶组及模型组，每组6只。于3组实验动物双侧膝关节制备直径约3 mm、深3 mm的膝关节软骨缺损模型后，超声凝胶组、普通凝胶组分别于缺损区对应植入经超声干预及未行干预的软骨细胞-藻酸钙凝胶复合物，模型组不作处理。术后观察实验动物一般情况，并于术后8、12周处死动物分别行大体观察、组织学观察及Wakitani组织学评分、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察。 结果大体观察见超声凝胶组与普通凝胶组缺损区均逐渐被新生组织填充，但前者为透明软骨样组织，后者为灰白色软骨样组织，且前者表面平整度及组织整合程度均优于后者；模型组缺损区修复缓慢且新生组织弹性差。术后8、12周修复区组织学观察及Wakitani组织学评分示超声凝胶组优于普通凝胶组，两凝胶组均优于模型组，差异有统计学意义（P < 0.05）；两凝胶组组内8周与12周间比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）。术后8、12周，超声凝胶组及普通凝胶组Ⅱ型胶原染色阳性表达面积、吸光度（A）值均显著高于模型组（P < 0.05），两凝胶组术后12周时比较差异亦有统计学意义（P < 0.05）。超声凝胶组组内8周与12周间比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；普通凝胶组及模型组两时间点间比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论经LIPUS干预的同种异体软骨细胞-藻酸钙凝胶复合物修复兔关节软骨缺损效果优于未干预的复合物。