目的 拟胆碱药物能够有效地抑制内毒素(LPS)刺激引起的巨噬细胞炎症性细胞因子大量释放,与内毒素耐受的巨噬细胞具有相似特性。本研究中,我们分析了内毒素耐受和抗胆碱药卡巴胆碱预处理巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor – α,TNFα)分泌量和细胞内含量的异同。

    方法 ①分离小鼠腹腔巨噬细胞,将其与LPS作用不同时间;②小鼠腹腔巨噬细胞分为三组:空白对照组(RPMI1640常规培养),LPS耐受+刺激组(LPS预刺激20h,再用LPS刺激4h)和LPS刺激组(RPMI1640常规培养20h后,再加LPS刺激4h);③分离大鼠腹腔巨噬细胞,分为三组:空白对照组、LPS刺激组及卡巴胆碱预处理后LPS刺激组。收集各组细胞培养上清液及细胞裂解液,用ELISA 方法检测TNFα浓度。

    结果 LPS预刺激巨噬细胞20h后再次用LPS刺激时,其TNFα分泌量不增加,与对照组接近;同时细胞内TNFα含量也不增加。未经LPS预刺激的巨噬细胞在受到LPS刺激后TNFα分泌量大幅增加,细胞内TNFα含量也伴随增加,即细胞分泌和贮存的TNFα量变化一致。卡巴胆碱预处理巨噬细胞受内毒素刺激后TNFα分泌量低于单纯内毒素刺激细胞,但细胞内的TNFα含量高于对照组,与单纯内毒素刺激组接近。

    结论 巨噬细胞建立内毒素耐受机制或受到抗胆碱药物作用后,再次受到LPS刺激后均表现为TNFα分泌的减少,但细胞内TNFα含量的变化规律不同。结果提示,内毒素耐受和拟胆碱药物可能通过不同的机制改变巨噬细胞的炎症反应特性。