顾晓峰 王琼 夏仁云 方煌  程力 王俊芳

摘要  目的 研究转化生长因子β1 (TGF-β1) 诱导永生化人前软骨干细胞 (IPSCs) 向髓核样细胞分化的可行性。方法 将体外培养的IPSCs 接种于温敏型壳聚糖水凝胶 (C/GP) 三维支架上，加入含TGF-β1的诱导培养基，低氧条件下进行诱导培养，观察三维支架上IPSCs的生长及分化情况。7 d后行Alcian Blue染色，分析细胞外基质糖胺聚糖（GAG）合成情况，并收集细胞，提取RNA。RT-PCR检测诱导前后髓核样细胞标志基因Ⅱ型胶原（Collagen Ⅱ）和蛋白聚糖（Aggrecan）的表达情况，Western Blot 检测诱导前后细胞内β-catenin蛋白表达水平的变化。结果 IPSCs在三维支架上生长状态良好，诱导7 d 后，Alcian Blue染色表明，细胞外基质GAG的合成明显增多，实验组（诱导培养基）明显多于对照组（普通培养基）。RT-PCR证实Ⅱ型胶原和Aggrecan的基因表达水平明显增高，实验组明显高于对照组；Western Blot证实细胞内β-catenin蛋白表达水平明显上调，实验组明显高于对照组。结论 IPSCs经TGF-β1诱导可在体外定向分化为髓核样细胞，诱导分化后的细胞具有良好的分泌功能，能够有效地分泌细胞外基质成分。TGF-β1可能通过上调细胞内β-catenin的表达诱导IPSCs向髓核样细胞分化。