魏均强   张伯勋   郑晓飞    陈华    田学忠   唐佩福   宋青    黎檀实

目的 明确萎缩性骨不连组织中表达上调的数种微小RNA（micro RNA，miRNA）与其相应靶基因mRNA、蛋白在hBMSCs 成骨分化过程中的表达变化趋势和生物学功能。 方法 取自体髂骨植骨手术患者的髂骨骨髓血，采用密度梯度离心法分离培养hBMSCs。取第4 代hBMSCs 以成骨诱导培养液诱导成骨分化，分别提取0、12 h，1、2、4、7、14 d 时的细胞总RNA 和蛋白，进行miRNA 的实时定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）、相应靶基因mRNA 的qRT-PCR 和蛋白Western blot 检测。 结果 诱导hBMSCs 成骨分化时，成骨性靶基因碱性磷酸酶（alkaline phosphatase liver/bone/kidney，ALPL）、PDGF-α 多肽（PDGF-α polypeptide，PDGF-A）和BMP-2 的mRNA 和蛋白表达在多数时间点同对照（0 h）相比增加（BMP-2 在12 h 和1 d 时下降），1 ～ 7 d 变化最为显著。不同时间点的miRNA、靶基因mRNA 和蛋白表达水平存在差异，其中hsa-miRNA-149* 和hsa-miRNA-654-5p miRNA 含量的变化趋势与各自靶基因ALPL 和BMP-2 的mRNA 及蛋白表达水平总体上成负相关（P < 0.05），hsa-miRNA-221 与其靶基因PDGF-A 的变化趋势无明显负相关关系（P > 0.05）。 结论 诱导hBMSCs 成骨分化过程中，hsa-miRNA-149* 和hsa-miRNA-654-5p 对其相应靶基因ALPL 和BMP-2 的mRNA 及蛋白存在密切调控关系。